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新闻37度恒温培养箱进行初代细胞培养简介 打印返回
时间:2020-10-05 阅读:29
   37度恒温培养箱带定时功能的数显微电脑控制器,使用稳定可靠。内胆为不锈钢制作,外壳为钢板喷塑处理的恒温培养箱厂家。电热膜加热方式,加热速度快温度均匀性好,切断电后仍能保持较长时间的恒温。双重门结构,电机控制开关,内层玻璃门打开时,微风循环与加热自动停止无过冲之弊。设有独立限温报警系统,超过限制温度即自动中断,保证实验安全运行不发生意外。
  初代(原代)培养是从供体获取组织后的首次培养。其优点是组织和细胞刚刚离体,生物性状尚未发生很大的变化,具有二倍体遗传性状,在供体来源充分、生物条件稳定的情况下(年龄、性别),在一定程度上能反映体内状态。
  实验原理:
  合成培养基胰蛋白酶消化培养法,能把组织块分散成细胞团或单个细胞,便于细胞从培养液中摄取营养和排出代谢产物,细胞能较快地长成单层。本法尤适用于培养大量组织,细胞产量高;但用于经常性小量培养工作稍显繁琐,无菌操作不良时且易污染。
  实验材料:试剂、试剂盒、培养液、胰蛋白酶。
  仪器耗材:恒温培养箱、吸管、平皿、培养瓶、烧杯、搅拌器、三角烧瓶、不锈钢筛、眼科剪、眼科镊、计数板。
  37度恒温培养箱进行细胞初代培养的主要步骤:
  1.准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟;
  2.布局:点燃酒精灯(或煤气灯),安装吸管帽(应通过火焰);
  3.组织处理:把组织块置入烧杯中,用试剂盒漂洗2-3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30-60分钟;
  4.剪切:用眼科剪把组织块切成2-3毫米大小的块,以便于消化;加入比组织块总量多30-50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞;
  5.消化:或用恒温水浴,或置入37度恒温培养箱消化均可,消化中每隔20分钟应摇动一次,如用电磁恒温搅拌器消化更好(消化前瓶中需置一无菌搅棒)。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定;
  6.分离:在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,立即终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块;低速离心消化液5分钟,吸出上清,加入适量含有血清的培养液;
  7.计数:用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中;对大多数细胞来说,pH要求在7.2-7.4范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说胆液体变酸,可用NaHCO3调整;
  8.培养:置入36.5℃温箱培养;如用CO2温箱培养,瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽(松口)堵塞,纱布塞易生霉菌,每次换液时需更换新塞。
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